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造成陽性樣本漏檢的可能原因有哪些?

2016-07-07 16:15

實時熒光定量PCR擴增曲線包括基線期,指數擴增期,線性擴增期和擴增平臺期,標準的曲線應該呈典型的S型。不規則曲線可以根據曲線的具體情況來分析:1)曲線呈斜線上升原因:熱蓋失靈或熱蓋沒蓋緊,導致控溫不準、液體揮發。解決辦法:更換儀器熱蓋或將熱蓋蓋緊。圖1 曲線呈斜線上升2)擴增曲線分成兩段(斷裂)圖2擴增曲線分成兩段(斷裂)原因:基線的終點大于Ct值,通常是因為模板DNA濃度偏高,CT值< 15,而基線仍然取3-15,其中包含部分擴增信號,導致曲線被壓下去。解決方法:減小基線終點,至Ct值前4個循環,重新分析數據。3)直線擴增曲線圖3 某些樣本出現直線擴增曲線原因:探針部分降解解決辦法:建議更換試劑進行測試。4)曲線平臺期下掉原因:蓋子沒蓋緊解決辦法:PCR反應管蓋子蓋上后,檢查蓋子是否蓋緊。圖4 曲線平臺期下掉

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